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核酸酶切反應原理及注意事項

A載體和外源DNA的酶切一、實驗目的學習和掌握核酸的酶切操作原理；通過酶切獲得可進行體外重組的載體和外源DNA。二、實驗原理限制性內(nèi)切酶能特異地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內(nèi)或其附近的特異位點上，并切割雙鏈DNA。絕大多數(shù)限制酶識別長度為4至6個核苷酸的回文對稱特異核苷酸序列(如EcoRⅠ識別六個核苷酸序列：5'-G↓AATTC-3')，有少數(shù)酶識別更長的序列或簡并序列。Ⅱ類酶切割位點在識別序列中，有的在對稱軸處切割，產(chǎn)生平末端的DNA片段(如SmaⅠ:5'...

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質(zhì)粒DNA的提取實驗方法和步驟

質(zhì)粒DNA的提取實驗方法和步驟一、實驗目的通過本實驗學習和掌握堿裂解法提取質(zhì)粒的原理和步驟。二、實驗原理從細菌中分離質(zhì)粒DNA的方法都包括3個基本步驟：培養(yǎng)細菌使質(zhì)粒擴增；收集和裂解細胞：分離和純化質(zhì)粒DNA。采用溶菌酶可以破壞菌體細胞壁，十二烷基磺酸鈉(SDS)和TritonX-100可使細胞膜裂解。經(jīng)溶菌酶和SDS或TritonX-100處理后，細菌染色體DNA會纏繞附著在細胞碎片上，同時由于細菌染色體DNA比質(zhì)粒大得多，易受機械力和核酸酶等的作用而被切斷成不同大小的線性...

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PCR反應的基本原理與實驗技術

一、實驗目的：掌握PCR反應的基本原理與實驗技術二、PCR反應實驗原理PCR(PolymeraseChainReaction)-聚合酶鏈式反應，可以選擇性擴增一段DNA序列。其基本步驟是，首先將待擴增的模板DNA變性使之成為單鏈，DNA樣品中，特異性的引物能夠與其互補的序列雜交，在dNTPs和Taq酶存在時，就可以合成模板DNA的互補鏈，反應完成后，將反應混合物加熱使DNA雙鏈變性，溫度下降后，過量的引物又可以開始第二輪的合成反應。這種延伸-變性-退火-延伸的循環(huán)可以重復多次...

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瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的方法

一、實驗目的：通過本實驗學習瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的方法和技術。二、實驗原理DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應和分子篩效應。DNA分子在高于等電點的pH溶液中帶負電荷在電場中向正極移動。由于糖－磷酸骨架在結構上的重復性質(zhì)，相同數(shù)量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此他們能以相同的速度向正極方向移動。在一定的電場強度下，DNA分子的遷移速度取決于分子篩效應，即DNA分子本身的大小和構型。具有不同的相對分子質(zhì)量的DNA片段泳動速度不一樣，可進行分離。DNA分子的遷移速度...

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病毒純化方法

病毒是一類非細胞型生物，需要寄生在其活細胞體內(nèi)，雖然大部分病毒對人體是有害的，但是隨著科學的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)很多病毒有較高的利用價值。例如：可以作為基因工程載體的慢病毒、腺相關病毒等；還有噬菌體展示技術，可以幫助我們對蛋白質(zhì)進行相關研究；以及曾作為細胞融合應用的仙臺病毒；而病毒最重要的應用，就是用來制備滅活、減毒、亞單位疫苗。本期，我們主要對病毒疫苗生產(chǎn)過程中的純化方法進行介紹。病毒提純是病毒學研究的重要前提，病毒的相關詳細研究都需要高純度的病毒樣品。病毒純化是在病毒不受損、不失活...

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